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体外诊断qPCR引物及探针

作为分子诊断qPCR试剂盒中的核心原料, qPCR引物及探针的质量对于样本靶标检测的准确性,起到了极其关键的作用。而对于分子诊断的应用,对引物及探针的纯度、荧光强度和洁净度等一系列指标提出更高的要求。vns59859威尼斯城官网在常规荧光探针的基础上,开发了性能更好的DBQ系列双淬灭、SF系列亲水改性、SX系列荧光增强等高级荧光探针。自以qPCR技术为基础的分子诊断应用在国内外兴起开始,vns59859威尼斯城官网-999.8vnsr威尼斯人生物即不断对生产工艺进行优化升级。目前,vns59859威尼斯城官网生产的引物及探针,已被国内外大量的分子诊断试剂盒生产商采用。

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vns59859威尼斯城官网的优势

  1.  上海、武汉和南京独立的IVD引物探针工厂,10万级生产车间,ISO9001和ISO13485认证;
  2.   专门经过优化的HPLC_CE (IVD)纯化,在保证纯度的前提下,避免外源性污染;
  3.  可选择额外定制QC检测:qPCR 探针荧光检测、NTC检测及关键指标批次间差异检测;
  4.  建立周期性质量跟踪体系并定期出具质量跟踪报告。

订购信息

IVD qPCR引物

IVD qPCR Primers

包含一对正反义链,常规情况下不带修饰。IVD专用的 qPCR引物全部在符合医药诊断级的10万级洁净车间生产及纯化,可选择多种纯化方式,推荐专门针对IVD优化的HPLC_CE (IVD)纯化。

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
HPLC HPLC_CE (IVD)* 11~59 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) 3~5工作日

备注:

*HPLC_CE (IVD)为推荐纯化方式,如需考虑成本,也可考虑ULTRAPAGE及标准HPLC纯化方式,如对引物纯度要求更高,则可选择2X HPLC纯化方式。选择这些纯化方式的引物均保证在符合医药诊断级的标准的10万级洁净车间内生产;

**如引物长度在碱基范围之外,请在订购前与技术支持进行咨询沟通。

IVD qPCR探针

IVD qPCR Probe

通常为一条双端分别修饰荧光和淬灭基团的单链DNA,其中也包含具有双重淬灭保障的双淬灭荧光探针。vns59859威尼斯城官网更是在常规荧光探针的基础上,开发了性能更好的DBQ系列双淬灭、SF系列亲水改性、SX系列超级荧光等高级荧光探针。IVD专用的 qPCR引物全部在符合医药诊断级的10万级洁净车间生产及纯化,推荐专门针对IVD优化的HPLC_CE (IVD)纯化,可在保证纯度的基础上有效避免外源性污染。

探针修饰方式及基团说明请查看IVD qPCR探针修饰基团说明

纯化方式 碱基范围 交付形态 包装形式 额外QC 合成周期
HPLC HPLC_CE (IVD)* 11~40 mer 干粉
液体
管装
96孔板
384孔板
纯度(CE) ≤5工作日

备注:

*HPLC_CE (IVD)为推荐纯化方式,如需考虑成本,也可考虑标准HPLC纯化方式,如对引物纯度要求更高,则可选择2X HPLC。选择这些纯化方式的引物均保证按医药诊断级的标准在10万级洁净车间安排生产;

**如引物长度在碱基范围之外,请在订购前与技术支持进行咨询沟通。

  IVD qPCR 常规双端修饰荧光探针

探针类型 淬灭修饰基团 荧光修饰基团 特点
BHQ系列荧光探针 BHQ1/BHQ2/BHQ3 点击查看
IVD qPCR探针修饰基团说明
吸收光谱范围广,从430nm-730nm,通过BHQ1/BHQ2/BHQ3同系列三个淬灭基团,可搭配大多数的荧光基团,适用于多种检测
MGB荧光探针 MGB 和传统探针比,相同长度的序列,可增加约10°C的Tm值,并稳定探针与靶标的复合物。因此,MGB探针明显短于传统探针,并且具有更好的检测特异性
TAMRA荧光探针 TAMRA 发射光谱广,其固有荧光产生背景信号,会潜在降低基于TAMRA检测的灵敏度。使用TAMRA作为淬灭剂的探针通常更长(30-40 nt),不推荐在多重qPCR过程中使用
Eclipse荧光探针 Eclipse 本底信号更低,并且Eclipse具有较宽的吸光范围,适用于多重qPCR反应
Dabcyl分子信标探针 Dabcyl Dabcyl由于其吸光特性且无残留荧光,已被广泛用作诊断探针(如分子信标)中的淬灭剂

  常规替代增强型高级荧光探针

探针类型 淬灭修饰基团 荧光修饰基团 特点
DBQ系列双重淬灭探针 DBQ1/DBQ2/DBQ3 点击查看
IVD qPCR探针修饰基团说明
在探针中间额外修饰了一个特殊淬灭基团,和3’的淬灭基团形成双重淬灭,能显著降低荧光本底信号,提高荧光增量。推荐替代BHQ系列,尤其适用于较长片段的探针序列。DBQ1/DBQ2/DBQ3可部分替代BHQ系列。
SF系列亲水改性探针 点击查看
IVD qPCR探针修饰基团说明
SF670/SF695/SF565 针对原始Cy系列水溶解性差的缺点,进行了亲水性改造,荧光强度得到显著提高。SF670、SF695和SF565可替代Cy5、Cy5.5和Cy3。
SX系列荧光增强型探针 SX670 和原始替代荧光基团相比,其荧光强度能得到倍数级的提高。目前已开发了SX670用于替代Cy5。

DBQ1双淬灭探针和BHQ1常规探针对比实验

在相同的测试条件和环境下,常规探针组均为FAM-BHQ1修饰,双淬灭探针组均为FAM-DBQ1修饰,采用HPLC纯化,此次实验使用ABI 7500检测qPCR,DBQ1双淬灭探针无论是本底和荧光增量均明显优化BHQ1

SF670荧光探针和Cy5荧光探针对比实验

在相同的实验条件下测试SF670与Cy5常规淬灭探针实验对照。均采用HPLC纯化,此次实验使用ABI 7500检测qPCR, SF670荧光探针,本底荧光比CY5低,荧光增量比CY5高

SX670荧光探针和Cy5荧光探针对比实验

在相同的实验条件下测试XS670与Cy5常规淬灭探针实验对照。均采用HPLC纯化,此次实验使用ABI 7500检测qPCR, SX670荧光探针,荧光增量比CY5极大提高

质量控制

除标准质检外,针对于IVD qPCR应用的荧光探针,vns59859威尼斯城官网可以通过额外定制QC检测来给予进一步的质量保证。

  荧光值酶切增量(FLU):确保TaqMan探针、分子信标等常规双标记引物的荧光、淬灭基团功能完全正常。

酶切增量检测案例

对照组由于不含DNase I,双标记探针保持完整,荧光基团被淬灭,只检测到本底荧光值195.1;酶切组中由于含有DNase I,双标记探针被水解,荧光基团脱离淬灭范围,检测到明显的荧光增强,荧光值达到11486.9,为本底荧光的58.9倍,符合客户定制的质控标准。

  人源污染检测(HSC):避免引物污染有人gDNA。

人源污染检测(HSC)案例

(使用常规人源DNA对应的引物、探针,将待测Oligo作为模板,配制扩增体系,进行qPCR检测,检测扩增曲线及对应Ct值。A:45个反应循环内扩增曲线呈平线,系统判断无Ct值,则说明引物探针纯净,无人源模板污染;B:45个循环内,扩增曲线出现翘起,系统判断出Ct值,则说明引物探针有人源基因组DNA污染。

  无模板对照检测(NTC):杜绝阴性对照出现假阳性。

无模板对照检测(NTC)案例

(将订单中引物探针配制为qPCR体系,使用水作为模板,进行探针法qPCR反应,通过反应的扩增曲线及系统记录Ct值,判断引物探针中是否有模板污染。A:若45个循环内,扩增曲线为平线,系统判断无Ct值,则说明引物探针纯净,无模板污染;B:若45个循环内,扩增曲线出现翘起,系统判断出Ct值,则说明引物探针有模板污染。)

订购方式

直接登录引物合成网购系统,自助进行常规DNA合成的定制;

在下方“资源>文档下载”区下载对应的服务订购表,发送邮件至synth@sangon.com ,由订单中心技术人员处理您的询价;

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联系方式

引物合成订单中心(上海总部合成部)
电话:021-57072173/57072172/57072171
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